HPLC检测奶粉中三聚氰胺

HPLC检测奶粉中三聚氰胺

仪器与条件：LC7000高效液相色谱仪(海能仪器);二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm;柱温：40℃。DIONEXC18(4.6×250mm);缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。离子交换固相萃取柱PCX 60mg/3mL。

试剂与样品试剂:甲醇、乙腈;氨水、乙酸铅、三氯乙酸;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。样品：奶粉。

检测方法(三聚氰胺HPLC-UV检测)：

1.样品前处理

提取：称取奶粉样品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)净化(PCX小柱，60mg/3mL)。活化及平衡：3mL甲醇，3mL水。

上样：加入提取液3mL。淋洗：3mL水;3mL甲醇弃去淋洗液并将小柱抽干。洗脱：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析。

2.检测

样品经均质，1%三氯乙酸溶液提取，用固相萃取小柱净化，减压浓缩后以甲醇溶解定容，三聚氰胺的HPLC测定方法。色谱柱：DIONEXC18(4.6×250mm);标准：国家标准方法;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=90:10;流速：1.0mL/min;柱温：40℃;波长：240nm。平均回收率大于90%，RSD小于3.0%，线性范围为1mg/L～100mg/L。

三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，我们按照国家公布的三聚氰胺检测方法，可以得到良好的分离效果。

结论：

1.可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度，批次重复性好。

2.检测过程更加科学：三聚氰胺可得到良好的保留与分离，避免了复杂过程。

3.有效地降低了杂质对检测结果的影响，提高了检测的灵敏度，延长了色谱柱的使用寿命。