紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量

黄酮类化合物是自然界中很重要的一大类天然有机化合物，广泛存在于药用植物、水果和蔬菜中，特别是在高等植物的花，叶，根中较多^[1]，其生理作用广泛：不仅对心血管系统 消化系统有作用，且具有抗炎、抗菌及抗病毒、解痉等作用^[2]，是重要的功能食品添加剂，天然的抗氧化剂，天然色素，天然甜味剂等^[3]。

剑麻所属百合科，为单子叶、旱生、肉质、多年生一稔草本植物。开花时大型圆锥花序生茎顶，花绿色，主茎可达5 m 以上^[4]。由于剑麻叶片内含丰富的纤维，是纤维工业的重要原料，所以对其研究一直集中在纤维方面，对于剑麻花的研究未见报道。随着化学纤维的发展，剑麻纤维工业受到一定的冲击，为了更好的综合开发利用剑麻资源，本文对剑麻花中的总黄酮含量进行测定，旨在为剑麻花的研究和开发提供理论依据及检测手段。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

UV- 2550型紫外分光光度计 日本岛津公司；KQ 5200B型超声波清洗器  昆山超声仪器有限公司，DHG-9240A 型电热恒温鼓风干燥箱  上海一恒科技有限公司

    甲醇为分析纯：芦丁标准品购于中国药品生物制品鉴定所；剑麻花 采自淮海工学院校园内。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的制备

    准确称取10 mg芦丁标准品，用甲醇溶解并定容100 mL得浓度为100 g/mL的标准溶液，用时稀释。

1.2.2 样品溶液的制备

    准确称取粉碎干燥的剑麻花 2.0000 g 用45ml 甲醇浸泡16 h 超声震荡40 min过滤,重复洗涤沉淀3次合并滤液，并定容至50 mL。

2 结果与讨论

2.1 样品的定性分析

    为了充分证实提取物是黄酮类化合物，我们用2种方法进行了定性实验

    a.显色反应^[5] 取剑麻花提取液 2m; 加镁粉少量盐酸34滴，呈橙红色

b.具有紫外光谱特征峰: 黄酮类化合物在200~400nm区域内存在2个主要吸收峰^[6]：峰带I 300~400nm 和峰带II 220~280nm。将提取液用紫外分光光度计在紫外区测定，258 nm 和360 nm处有特征峰，见图 1。实验证实，剑麻花中的提取物是黄酮类化合物。

2.2 测定波长的选择

    将标准溶液和样品溶液以甲醇为空白对照，在200~500 nm 进行扫描，结果显示样品溶液和标准溶液在258 nm 处有最大吸收(图1) 故选定258 nm为测定波长。

2.3 总黄酮提取条件的确定

    选择浸泡时间(8、16、24h) 甲醇用量(15、30、45ml)和超声震荡时间(20、40、60min)进行了3 因素3水平正交试验，确定提取剑麻花中黄酮的最佳条件，结果发现提取的最佳条件为45 ml甲醇浸泡16 h 后超声震荡 40 min。将滤渣按最佳提取条件做二次提取，然后

在选定的测定条件下进行测定，结果在258 nm处无吸收，证明本法所选的提取条件已将黄酮提取完全。

2.4 标准曲线的绘制

    精密吸取标准溶液 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml 分别置于10ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，以甲醇为空白对照，于258 nm处测定吸光度以吸光度值(A)对浓度(c)作图，结果表明，芦丁浓度在1.0030 g/ml 范围内与吸光度呈线性关系，回归方程为A=0.052c +0.0292 r =0.9997。

2.5 回收率试验

分别移取2.5ml 标准溶液和0.5ml 剑麻花提取液于25 ml容量瓶中，各5 份，用甲醇稀释至刻度，摇匀测定吸光度，计算的回收率结果见表。

2.6 样品分析

精密吸取提取液0.2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀至刻度，按上述测定方法连续测定5次，计算样品中总黄酮含量和相对标准偏差，结果显示剑麻花中总黄酮含量为 1.56% ，RSD为0.07% ，表明本法具有良好的重现性。

以芦丁为标准，采用紫外分光光度法测定剑麻花中的总黄酮含量，其加标回收率和重现性均较好，可作为剑麻花总黄酮含量测定的方法。