高效液相色谱法测定辣椒红素

高效液相色谱法测定辣椒红素

　　摘 要：采用超声波辅助丙酮提取辣椒中的辣椒红素，高效液相色谱法进行测定。色谱条件为色谱柱：4.6×250mm，5um;流动相：甲醇—二氯甲烷;流速：1ml/min;检测波长：474nm;柱温：30℃;进样量：10μl。结果表明，峰面积与待测物浓度呈良好的线性关系。

　　关键词：辣椒红素;高效液相色谱;测定

　　辣椒富含辣椒碱、二氢辣椒碱、辣椒红素、辣椒玉红素、β-胡萝卜素、碳水化合物、维生素C以及钙、磷等等。其中辣椒碱和二氢辣椒碱是辣椒中的辛辣成分，具有生理活性和持久的消炎镇痛作用，内服可以促进胃液分泌，增进食欲，缓解胃肠胀气，改善消化功能和促进血液循环;外用可以用作治疗牙痛，肌肉痛，风湿病和皮肤病等疾病，对治疗神经痛有显著疗效。 辣椒红素、辣椒玉红素已被美国FAO、英国、日本、EEC、WHO等组织审定为无限性使用的天然食品添加剂，其国际市场十分紧俏。目前，美国、德国、日本、韩国等国家对辣椒碱、辣椒红素的提取技术及应用开发研究已形成国际科技界的研究热点。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要材料与试剂 干红辣椒，辣椒红素标样，纯度93.3 %;甲醇(色谱级)，丙酮(分析级)，二氯甲烷(分析级)，

　　1.2 主要仪器与设备

　　LC7000型高效液相色谱仪(包括LC7011泵，LC7050自动进样器，LC7031注温箱LC7060二极管阵列检测器，色谱柱C18(250 ×4.6 mm，5μm))，Sine Sonic 150型超声波洗净机，TDL-40B型离心机，BS210S型赛多利斯电子分析天平，0.45 μm微孔滤膜。

　　1.3 试验方法

　　1.3.1 色谱条件

　　色谱柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不锈钢柱;流动相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速为1ml/min;进样量：10μl;室温：(28±2)℃;色谱柱温度：30℃;检测波长：474nm，以峰面积外标法定量。

　　1.3.2 系统适用性试验

　　(1)检测波长的确定。称取一定量的辣椒红素标准品，用丙酮溶解后，配制成浓度为0.1mg/ml的标准品溶液，通过HPLC的紫外检测器扫描得出辣椒红素的最大吸收波长。

　　(2)标准曲线的绘制。将辣椒红素标准品5mg倒于10ml容量瓶中，加入丙酮至刻度，摇匀。逐级稀释，分别配置成浓度为0.002 mg/ml，0.004 mg/ml，0.010 mg/ml，0.020 mg/ml，0.030 mg/ml，0.050 mg/ml，0.060 mg/ml，0.070 mg/ml，0.080 mg/ml，0.090 mg/ml，0.100 mg/ml，0.150 mg/ml，0.200 mg/ml的溶液，吸取10μl，上机检测。根据标样的浓度与峰面积在Lcsolution工作站中得到标准曲线、回归方程、线性范围及相关系数绘制标准曲线。

　　(3)精密度试验。取任意一样品，连续5次进样，并对其进行面积积分。本试验为了有针对性地考察，采用辣椒红素标准品作为研究对象，分别吸取浓度为0.1mg/ml的辣椒红素标准品溶液2μl，统计峰面积并计算相对标准偏差RSD%。用于评价仪器的可靠性。

　　(4)重复性试验。称取5份同一批样品0.2g，分别加入5 ml丙酮，超声波提取三次，3500r/m的情况下离心10min，收集提取液，定容到25ml，13000r/m的情况下离心20min，上机检测。统计峰面积并计算相对标准偏差RSD%。用于评价方法的可靠性。

　　(5)加样回收率试验。根据参考文献，分别称取同一批样品0.2g，共称取6次，分别加入4ml丙酮，2个为一组平行，分别精密加入浓度为0.5mg/ml辣椒红素标准溶液100μl，100μl，120μl，120μl，150μl，150μl。进行HPLC方法测定。回收率试验用于评价测定方法的准确性。

　　1.3.3 辣椒素与二氢辣椒素的超声波辅助提取 将样品在30 ℃恒温冻干后粉碎成粉末，处理后称取0.5 g粉末样品，加入一定量的丙酮，涡旋振荡后在超声波150 W，超声时间25min，超声温度35℃，3500 r/min条件下离心10 min，将提取液倒入25 ml容量瓶中，连续提取3次[8]，收集提取液，丙酮定容，摇匀后，溶液过0.45 μm微孔滤膜，滤液取10 μl上机测定。

　　2 结果与讨论

　　2.1 系统适应性试验

　　2.1.1 HPLC检测波长的确定

　　在辣椒红素最大吸收值处，得到它的光谱图，如图1。由图1可以看到辣椒红素的最大吸收波长为474mm。

　　从表1的结果可见，用HPLC法测定辣椒中辣椒红 素含量，RSD为0.24%，表明该仪器的精密度良好，测定结果较满意。

　　2.1.6 重复性试验结果

　　取同一批样品5份，按照测定方法测定，结果见表2。

　　从表2结果可见，用HPLC法测定辣椒中辣椒红素含量，RSD为0.20%，表明此方法的重复性好，测定结果较满意。

　　2.1.7 加样回收试验结果

　　分别称取同一批样品0.2g，共称取6次，分别加入 4ml丙酮，2个为一组平行，加入不同量的辣椒红素标准品。根据公式计算加样回收率。结果见表3。

　　由回收率试验结果证明，以辣椒红素为标准品，利用丙酮为提取剂，超声波测定辣椒中辣椒红素含量符合分析要求，证明了辣椒红素的提取分析中此方法的可行性及准确度高。

　　3 结论

　　(1)本研究结果显示，提取剂为丙酮，固液比1：20，超声时间25min，超声温度35℃，辣椒红素得率为0.103%。

　　(2)HPLC测定辣椒红素的最佳条件是：色谱柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不锈钢柱;流动相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速为1ml/min;进样量：10μl;室温：(28±2)℃;色谱柱温度：30℃;检测波长：474mm，以峰面积外标法定量。

　　(3)从天然农作物中提取有效成分是今后食品工业的发展趋势，开发纯天然、低毒害、无污染的活性成分是目前研究的热点之一。辣椒红素是纯天然的食品添加剂，有很好的应用前景。

　　参考文献

　　[1]王丽霞，庞杰. 辣椒红色素的检测方法. 产品加工， 2003，1：44-47.

　　[2]杨博智，谢达平，张竹青. 辣椒红色素的提取方法和应 用. 加工利用，2007，2：26-29.

　　[3]黄巍，邹学校，马艳青. 辣椒红色素的研究进展. 辣椒 杂志(季刊)，2008，2：56-60.

　　[4]刘思杨，贺稚非，贾洪峰. 辣椒红色素的研究进展. 四 川食品与发酵，2005，3：45-48.

　　[5]张甫生，庞杰，徐秋兰，等. 辣椒红色素的研究进展. 农产品加工，2003，2：52-56.

　　[6]刘蓉，刘志敏. 辣椒红色素提取方法研究. 上海蔬菜， 2006，3：90-92.

　　[7] 韩晓岚，胡云峰，赵学志，何洪巨.高效液相色谱法测定辣椒红素 2010,3