粗脂肪测定方法与乙醚的关系

粗脂肪测定方法与乙醚的关系

食品中脂肪的存在形式有游离态的，也有结合态的。游离态的脂如动物性脂肪和植物性脂肪。结合态的脂如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白等中的脂肪与蛋白质或碳水化合物等成分形成的结合态。对大多数食品来说，游离态的脂肪是主要的，结合态的脂肪含量较少。

一、 提取剂的选择

脂类的结构比较复杂，到现在没有一种溶剂能将纯脂肪萃取出来，也就是说提取出来的都是粗脂肪。(大部分是脂肪，还有一些其他成分)。前面讲性质时讲到，脂类不溶于水，易溶于有机溶剂。测定脂类大多采用低沸点的有机溶剂。常用的溶剂有乙醚、石油醚、氯仿—甲醇混合溶剂。其中乙醚溶解脂肪的能力强，应用最广泛。下面我们讲他们的特点：

(一) 乙醚(非极性)的优缺点

1、 优点

　　(1) 乙醚的沸点低为34.6℃

　　(2) 溶剂脂肪能力强大于石油醚

2、 缺点

(1) 能被2%的水饱和

(2) 含水的乙醚抽提能力降低(氧与水能形成氢键使穿透组织能力降低，即抽提能力下降)

(3) 含水的乙醇是非脂成分溶解，而被抽提出来，使结果偏高(糖蛋白质等)

4) 使结果偏高，而且乙醚易燃。

下面我们有一组试验，通过实验我们可以比较一下结果

提取卵磷脂

25℃

mg / 100g

低分子成分

无水乙醚

含水乙醚

葡萄糖

10.5mg/100g

315mg/100g

蔗糖

15mg/100g

150mg/100g

丝氨酸

0

15mg/100g

NaCl

0

25mg/100g

由此可见，乙醇含水后，能将样品中非脂成分溶解增加结果的重量，因此，使用乙醚时，样品不能含水分，必须干燥。而且使用乙醚时室内需空气流畅。因为乙醚在空气中，最大允许浓度为400ppm，超过这个极限易爆炸。

另外乙醚一般贮存在棕色瓶中放置一段时间后，光下照射就会产生过氧化物，过氧化物也容易爆炸，如果乙醚贮存时间过长，在使用前一定要检查有无过氧化物，如果有应当除掉。

3、 检查过氧化物的方法

乙醚中+少量的Fe2++少量KCNS(硫氰酸钾)待到红色出现，说明有过氧化物存在，反之为无色，排除过氧化物的方法如下。

4、 排除过氧化物的方法

含过氧化物乙醚+FeSO4(少量) ------ 可除掉过氧化物

A、过氧化物的检验：在干净和试管中放入2~3滴浓硫酸，1mL2%碘化钾溶液(若碘化钾溶液已被空气氧化，可用稀亚硫酸钠溶液滴到黄色消失)和1~2滴淀粉溶液，混合均匀后加入乙醚，出现蓝色即表示有过氧化物存在。

B、过氧化物的去除：除去过氧化物可用新配制的硫酸亚铁稀溶液(配制方法是FeSO4.6H2O 60g，100mL水和6mL浓硫酸)。将100mL乙醚和10mL新配制的硫酸亚铁溶液放在分液漏斗中洗数次，至无过氧化物为止。

(二)石油醚

石油醚溶解脂肪的能力比乙醚弱些，但吸收水分比乙醚少。没有乙醚易燃。使用时允许样品含有微量水分，它没有胶溶现象，不会夹带胶溶淀粉、蛋白质等物质。采用石油醚提取剂，测定值比较接近真实值。

对于乙醚、石油醚这两种溶剂适用于已烘干磨碎样品，不易潮解结块的样品，而且只能提取样品种中游离态的脂肪，不能提取结合态的脂肪，对于结合态脂，必须预先用酸或碱破坏脂类和非脂成分的结合后才能提取。有时利用两种溶剂的优点，常常混合使用。

(三)氯仿-甲醇

氯仿-甲醇是另一种有效的溶剂，它对于脂蛋白，磷脂的提取效率较高，特别适用于水产品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。

二、样品的预处理

样品的预处理方法决定于样品本身的性质，牛乳预处理非常简单，而植物和动物组织的处理方法较为复杂。

1、粉碎：

粉碎的方法很多，不论是切碎、碾磨、绞碎或者采用均质等处理方法，应当使样品中脂类物理、化学以及酶的降解都要减小到最小程度。

2、加海砂

有的样品易结块，用乙醚提取较困难，为了使样品保持散粒状可以加一些海砂，一般加样品的4-6倍量(目的使样品疏松，这样扩大了与有机溶剂的接触面积，有利于萃取)。

3、加入无水硫酸钠

因为乙醚可被2%水饱和，使乙醚不能渗入到组织内部抽提脂肪的能力降低，所以有些样品含水量高时可加入无水硫酸钠，用量以样品呈散粒状为止。

4、干燥：

干燥的目的：提高脂肪的提取效率。干燥时要注意温度：温度过高(1)脂肪氧化(2)脂肪与糖、蛋白质结合变成复合脂;温度过低：脂肪易降解。

5、酸处理：

温度过高时脂与糖、蛋白质等接触，变成复合脂，产生复合脂后，不能用外极性溶剂直接抽提，所以要用酸处理，主要是把结合脂肪水解出去，下面有个实验大家看一下：

面包：采用直接萃取 1.20% 脂肪，酸处理后萃取 1.73%脂肪

干全蛋：采用直接萃取 36.74% 脂肪，酸处理后萃取 42.39%脂肪

从这个实验可以看出，变成复合脂类，利用直接萃取得到的结果偏低，经过酸水解将使蛋白质，碳水化合物与脂肪分开，这样是脂肪游离出来后，再提取得到的数据准确。

6、对有些样品还有大量的碳水化合物，测定脂肪时应先用水洗掉水溶性碳水化合物再进行干燥、提取。

乙醚的纯化

1、久藏的乙醚常含有少量过氧化物;

2、过氧化物的检验：在干净和试管中放入2~3滴浓硫酸，1mL2%碘化钾溶液(若碘化钾溶液已被空气氧化，可用稀亚硫酸钠溶液滴到黄色消失)和1~2滴淀粉溶液，混合均匀后加入乙醚，出现蓝色即表示有过氧化物存在。

3、过氧化物的去除：除去过氧化物可用新配制的硫酸亚铁稀溶液(配制方法是FeSO4.6H2O 60g，100mL水和6mL浓硫酸)。将100mL乙醚和10mL新配制的硫酸亚铁溶液放在分液漏斗中洗数次，至无过氧化物为止。